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投影技术助力超分辨显微成像:高速、自偏振调制的三维结构光照明

投影技术助力超分辨显微成像:高速、自偏振调制的三维结构光照明

 

High-speed auto-polarization synchronization modulation three-dimensional structured illumination microscopy
本期导读

 

DMD作为一种数字光调控(Digital light processing)器件,能够提供高速图案调制,为显示产业带来了技术革新,被广泛应用于投影仪及光刻设备等领域。在各种超分辨荧光显微成像技术中,结构照明显微成像技术能够在2倍于衍射极限分辨率条件下保持低光毒性与高时间分辨率,成为活细胞观测的主流方案。
鉴于此,北京大学未来技术学院的研究人员提出了一种基于数字微镜器件(DMD)和电光调制器(EOM)的高速、自偏振调制的三维结构光照明显微成像方法(DMD-3DSIM)。该方法将DMD的保偏快速切换特性与EOM的快速偏振旋转特性相结合,实现了多种亚细胞结构和动植物组织的高速3DSIM成像,其偏振调制系统具有偶极子取向解析能力,反卷积算法进一步提高了3DSIM的计算分辨率。相关成果以论文形式于近日在线发表于光学顶刊 Advanced Photonics Nexus 上。

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图1. 基于数字阵镜投影核心技术的开源硬件超分辨显微成像系统示意

技术路线

 

结构光超分辨成像主要可分为二维结构光照显微镜(2DSIM)和三维结构光照镜(3DSIM)两类。然而,2DSIM中的轴向分辨率与宽场显微镜相同,导致在散焦背景下对厚样本成像出现显著的重建误差。与此形成鲜明对比的是,具有轴向调制照明的3DSIM可以有效地将横向和轴向分辨率提高一倍。
传统3DSIM成像系统通过光栅和线偏振片,或铁电液晶空间光调制器(FLC-SLM)和分区半波片来调节照明结构光的方向、相位与偏振态。然而,基于光栅的3DSIM系统在成像中需要机械地平移与旋转,限制了3DSIM的成像速度;基于FLC-SLM的3DSIM系统则需要两个液晶相位延迟器进行同步的相位延迟,成本较高且调制速度依然受限。考虑到3DSIM相对于2DSIM而言需要更多原始图像以重构超分辨图像的特性,其硬件系统受限的切换速度与偏振调制精度会带来因样本运动与条纹调制度不足导致的各类伪影。
针对上述问题,该研究团队继2020年实现基于激光干涉的DMD-SIM(APL 2020)及2023年提出开源3DSIM重建算法Open-3DSIM (Nature Methods)后,将DMD的保偏、快速切换特性与EOM的快速偏振旋转特性相结合,实现了多种亚细胞结构和动植物组织的高速3DSIM成像。利用这一系统,该研究对背景散射较强并具有一定厚度的植物和动物组织进行了成像。实验结果如图2所示,分别为夹竹桃叶片、黑藻叶片和玉米根尖的WF和3DSIM结果以及小鼠肾组织切片肌动蛋白微丝的偶极子取向分布结果(p3DSIM)。实验呈现的提高的分辨率与光学层切能力进一步验证了DMD-3DSIM相对于WF成像的优势。

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图2. 植物和动物组织的DMD-3DSIM成像。(a) 夹竹桃叶片细胞壁。(b) 黑藻叶片中空结构。(c) 玉米根尖周期性聚集和分散结构。(d-f) 小鼠肾组织切片肌动蛋白微丝的WF、3DSIM和p3DSIM最大强度投影图像。(g-h) 相应的三维展示。37层。比例尺:2 μm。

鉴于DMD的相关技术在数字光处理中的广泛应用及其作为消费产品的成本效益,该研究公开了所有硬件组件和控制程序(文末链接)。结合该研究团队在先前发表的Open-3DSIM算法平台,期待该工作将为3D-SIM多维成像的软件硬件协同发展开辟出开源、开放社区的新途径。

论文信息:
  • Yaning Li, Ruijie Cao, Wei Ren, Yunzhe Fu, Yiwei Hou, Suyi Zhong, Karl Zhanghao, Meiqi Li, Peng Xi, High-speed autopolarization synchronization modulation three-dimensional structured illumination microscopy, Advanced Photonics Nexus, 2023

     

技术详见:
http://dx.doi.org/10.1117/1.APN.3.1.016001
https://www.nature.com/articles/s41592-023-01958-0
https://github.com/Cao-ruijie/DMD-3DSIM-hardware

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